作者简介:王宏高（1957.10—），男，原籍浙江义乌，浙江师范大学本科毕业，高档讲师、高档技师，主要是做中职生食物查验教育工作。

  摘要：在食物微生物查验课中，教材中的试验操作步聚一般是归于概括性的提示，关于初学食物微生物查验的中职生往往不能正确了解其意义，依据教育计划的按排，一个试验重复的几率较小，一次做出来的试验的成果没有可比性，学生不能发现试验进程中存在的问题。本文主要是针对细菌涂片标本制造及细菌的革兰氏染法试验对成果影响较大的操作进程做了改善，使学生正确的把握细菌标本的制造及革兰氏染色的办法。 

  一、前语食物微生物教育中的细菌标本的制造和细菌的革兰氏染色是食物微生物查验课的根底，正确把握该试验的操作办法关于了解食物微生物的理论知识学习起到事半功倍的作用，一起具有激起学生的着手试验的积极性和探究天然奥妙爱好。在教育实践中发现学生对细菌调查片的制造及革兰氏染色办法一般依据教材的提示进行，但因为学生了解上的误差及着手才能的差异，做出的细菌标本往往不是很抱负，革兰氏染色法染色时墨守成规，制成的标本作用差，终究影响细菌图画的调查，因为所运用的仪器显微镜的特殊性，试验成果同学之间没有可比性，不像食物的理化查验，同一个标本的试验成果同学之间具有可比性，可察觉缺点的地点。教师在教育时，以教材的试验操作提示为主，变革试验进程中对试验成果影响较大的试验操作办法，然后得到满足的试验成果。

  1.试验用菌种：培育24小时的地衣芽胞杆菌固体培育物、培育16～18小时的大肠杆菌固体培育物，要求此两种培育物在固体培育基中有单个的细菌菌落呈现，否则应从头进行划线.革兰氏染色液制造

  （1）结晶紫染色液：结晶紫1g溶解于20ml 95%乙醇中，然后与80ml 1%草酸铵溶液混合。

  （2）路果氏碘液：将固体的2g碘和1g固体碘化钾混合，然后参加少数的蒸馏水，充沛振动溶解，最后用蒸馏水定容至300ml。

  （3）沙黄染色液：将0.25g沙黄溶解于10ml 95%的乙醇溶液中，然后参加90ml蒸馏水稀释后运用。

  4.其他试验资料：无菌生理盐水、香柏油、二甲苯、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、吸水纸、火柴等。

  1．涂片：取两块载玻片，各滴上一滴生理盐水，用接种环别离挑取培育好的地衣芽胞杆菌和大肠杆菌固体培育物于生理盐水中，涂成薄膜。

  2．固定：将载玻片涂面向上，用手拿载玻片的一端，敏捷经过酒精灯火焰2～3次，，使细胞凝结，细菌固定在玻片上。

  5．脱色：载玻片上的水用吸水纸吸净，用95%的乙醇滴于涂片薄膜上方，滴洗至流出的乙醇不呈现紫色停止，即用自来水冲刷0.5min，用吸水纸吸干水 分。

  6．复染：涂片薄膜上滴加沙黄1滴，染色1～3min，用自来水冲刷。7．枯燥：于室温下天然枯燥或在酒精灯下枯燥。8．调查：枯燥后的涂片，在薄膜上滴香柏油1滴，置油浸镜下调查，革兰氏阳性菌呈紫蓝色，革兰氏阴性菌呈紫红色［1］。

  以上为食物微生物查验课中细菌制片及革兰氏染色试验教育内容，但学生在试验时因为了解上的差异，做出的试验成果往往不是很抱负。在教育进程中针对学生试验中存在的问题，笔者教育中作了改善。其存在的主体问题和改善办法如下：

  1．标本涂面制造：在标本制造中，涂片是最不易把握，且影响后续进程的操作及革兰氏染色的作用。

  （1）载玻片上滴加生理盐水。在试验中所有的学生都了解成滴加1滴生理盐水是用胶头滴管滴上1滴，此了解是十分片面，据测算，胶头滴管滴上1滴，约有0.1ml生理盐水，实践是不需要这么多的生理盐水的，假如用胶头滴管滴上1滴，制出来的细菌涂面会十分大，且不漂亮又糟蹋染料试剂，图1A，在枯燥操作进程时，因为涂面过大，不易枯燥，枯燥时刻需5min以上，有的学生爽性在这滴生理盐水中涂成1CM2巨细的涂面，其涂面需较长时刻的枯燥，严峻影响了教育进程。教育实践标明只需滴0.01ml生理盐水就够了。怎样来操控0.01ml的生理盐水，笔者的做法是：胶头滴管汲取生理盐水后，敏捷在载玻片上碰醮一下，不要揉捏胶头。

  （2）接种环挑取菌落的量。许多学生都有这样的心思，认为挑取菌落多能够获得好的试验成果，但恰恰拔苗助长，制好的标本因为细菌过多在显微镜下调查不到涣散的细菌，图2。在试验要挑多少菌落，能够以大肠杆菌的固体培育物单个细菌菌落为规范，用接种环挑取整个的菌落。地衣芽胞杆菌菌落较大，以大肠杆菌挑取的量为参照来挑取地衣芽胞杆菌的量。这样制出的涂面巨细和厚薄都比较适合。

  （3）涂片巨细把握。制好的标本涂面，要求漂亮，巨细适合。前述许多学生滴加的生理盐水一滴，量较多，必然形成涂面过大，影响制造速度，且糟蹋染料，正确操作办法是：滴加生理盐水的量、挑取的细菌量在上述的操作办法下，用接种环涂成1CM2巨细（约1分硬币），涂面成薄膜状，图1B，其细菌散布均匀。

  （4）标本涂面的固定。在固定前，涂面应在酒精灯的火焰高处，慢慢枯燥或天然干澡，天然枯燥因为授课时刻的约束，教育试验时一般不选用。有的学生性质急，把载玻片放在酒精灯的火焰中枯燥，或未枯燥就把涂面在酒精灯的火焰上固定，影响标本的质量。把枯燥的涂面在酒精灯上来回2～3次，玻片温度到达65～70℃，作涂面的固定。因为学生无经历，在酒精下固定的速度有慢有快，速度慢，固定的温度过高，细菌变形，在显微镜下失真严峻；速度快，细菌未能变性凝结，不能固定在玻片上，在冲刷时被水流冲掉。正确判别涂膜是否固定，在酒精灯上来回2～3次后，敏捷放在手背上试温，如手背感觉烫，其在酒精灯上来回2～3次的时刻慢了，固定温度过高；如感觉玻片仅仅微热，其在酒精上操作时速度过快，固定温度不行；在手背上不棘手，温度感觉不是很低，细菌已固定在玻片上了，标本涂面固定后就可进行染色。